貨源介紹

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　　智立中特（武漢）生物科技有限公司主要致力于質(zhì)粒微生物資源的保護(hù)、共享和持續(xù)利用，圍繞我國生命科學(xué)研究、生物技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展等重大需求，探索、發(fā)現(xiàn)、收集國內(nèi)外的微生物資源，妥善長期保存管理；在保證生物安全和保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的前提下，為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、衛(wèi)生健康、環(huán)境保護(hù)、科研教育提供質(zhì)粒載體物物種資源、基因資源、信息資源和專業(yè)技術(shù)服務(wù)。旗下質(zhì)粒載體網(wǎng)是一款提供質(zhì)粒載體展示及定制的專業(yè)型網(wǎng)站，由智立中特（武漢）生物科技有限公司聯(lián)合多家企業(yè)公司科研院校共同打造！主要展示了各種基因類型下的質(zhì)粒載體！

　　MSTO-211H細(xì)胞（提供STR鑒定報(bào)告）

　　（1）英文名稱：MSTO-211H

　　（2）中文名稱：人肺癌細(xì)胞

　　（3）細(xì)胞描述：MSTO-211H細(xì)胞株是1985年從一位肺二相間皮瘤患者的胸水中建株的。這個(gè)病人接受過多種藥物聯(lián)合前期化療。MSTO-211H細(xì)胞具有高親和力的EGF結(jié)合位點(diǎn)，并表達(dá)神經(jīng)元特異性烯醇酶(NSE)及人絨毛膜促性腺激素(HCG)的α與β亞基。未檢測(cè)到左旋多巴胺脫羧酶(DDC)，邦巴辛與神經(jīng)tensin。細(xì)胞過表達(dá)c-myc原癌基因，并沒有觀察到基因重排或擴(kuò)增。V-src,v-abl,v-erbB,c-raf1,Ha-ras,Ki-ras,和N-ras的表達(dá)呈陽性。未檢測(cè)到N-myc,L-myc,c-myb。在本庫通過STR鑒定結(jié)果正確。

　　（4）規(guī)格：T25方瓶或1ml凍存管

　　（5）細(xì)胞數(shù)量：1×10^6

　　（6）組織來源：人肺癌

　　（7）生長方式：貼壁生長

　　（8）細(xì)胞形態(tài)：上皮型

　　（9）培養(yǎng)液：RPMI-1640+10%FBS+1%P/S

　　（10）培養(yǎng)條件：37℃，5%CO2

　　（11）運(yùn)輸方式：常溫運(yùn)輸（T25方瓶）或干冰運(yùn)輸（凍存管）

　　細(xì)胞處理：

　　1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

　　將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

　　2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

　　1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

　　3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

　　3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

　　下面T25瓶為例；

　　1.細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

　　2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

　　3.將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。