貨源介紹

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　　細(xì)胞名稱：人嗜酸性粒細(xì)胞HESP

　　產(chǎn)品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1；1.5ml凍存管x2

　　細(xì)胞數(shù)量：1x10^6；1x10^6

　　保存溫度：37℃；-198℃

　　運(yùn)輸方式：常溫保溫運(yùn)輸；干冰運(yùn)輸

　　安全等級：1

　　用途限制：僅供科研3類

　　培養(yǎng)體系：DMEM(HYCLONE SH30022.01)+10%FBS+1%三抗

　　培養(yǎng)溫度：37℃

　　二氧化碳濃度：5%

　　簡介：人嗜酸性粒細(xì)胞HESP取自女性外周血，懸浮培養(yǎng)。

　　注釋：倍增時間35h

　　復(fù)蘇細(xì)胞收貨注意事項(xiàng)：

　　收到細(xì)胞后，靜置3小時，然后當(dāng)天更換新鮮培養(yǎng)基！！！原瓶培養(yǎng)基不能繼續(xù)使

　　用！！！該細(xì)胞訂單用戶訂購前，需核實(shí)確認(rèn)。

　　培養(yǎng)基貨號DMEM(HYCLONE SH30022.01或GIBCO C11965500BT）

　　胎牛血清（GIBCO 10099-141），必須與我們保持一致，如堅(jiān)持使用不同貨號培養(yǎng)基或者血清培養(yǎng)，產(chǎn)生售后問題，不予支持補(bǔ)發(fā)。培養(yǎng)基正常pH值為7.2-7.4，顏色呈現(xiàn)微紅偏黃，若顏色發(fā)生偏差變化，需要盡快更換完全培養(yǎng)基。

　　凍存細(xì)胞收貨注意事項(xiàng)：

　　收到細(xì)胞后，當(dāng)天存入-80℃冰箱或者-196℃的液氮罐中保存！！！該細(xì)胞訂單用戶訂購前，需核實(shí)確認(rèn)（凍存細(xì)胞以收到細(xì)胞后起14天之內(nèi)為售后保障期，不是保存多日開始復(fù)蘇后的14天之內(nèi)）培養(yǎng)基貨號DMEM(HYCLONE SH30022.01或GIBCO C11965500BT）

　　胎牛血清（GIBCO 10099-141），必須與我們保持一致，如堅(jiān)持使用不同貨號培養(yǎng)基或者血清培養(yǎng)，產(chǎn)生售后問題，不予支持補(bǔ)發(fā)。培養(yǎng)基正常pH值為7.2-7.4，顏色呈現(xiàn)微紅偏黃，若顏色發(fā)生偏差變化，需要盡快更換完全培養(yǎng)基。

　　常見問題：

　　1.運(yùn)輸途中，細(xì)胞會因?yàn)榛蝿釉斐杉?xì)胞脫落，此現(xiàn)象為正常現(xiàn)象，觀察后，靜置3小時。2.傳代后細(xì)胞漂浮原因：傳代前密度過大導(dǎo)致細(xì)胞擠出凋亡；消化過度；移液槍吹打力道過大。3.細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁性不好，嘗試換液并血清提至15%，待觀察，若效果還不佳，需要聯(lián)系銷售及技術(shù)老師。4.本產(chǎn)品有添加支原體抗污染劑及三抗（青霉素，鏈霉素，兩性霉素B），若收到細(xì)胞后2天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染，請立即聯(lián)系對應(yīng)銷售進(jìn)行補(bǔ)發(fā)；3-14天之內(nèi)的污染，需要聯(lián)系對應(yīng)銷售溝通并且核實(shí)詳情后，進(jìn)行下一步售后處理。細(xì)胞復(fù)蘇操作說明（針對凍存細(xì)胞）實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺，CO2培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，水浴鍋，離心機(jī)

　　實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清，三抗

　　實(shí)驗(yàn)材料：T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，需復(fù)蘇的細(xì)胞，移液槍，槍頭，離心管

　　實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1.從液氮罐中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。

　　2.從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，移液槍吸出細(xì)胞懸液，加到離心管并滴加5倍以上完全培養(yǎng)基并混勻。

　　3.操作離心，調(diào)至1000轉(zhuǎn)/分，時長10分鐘

　　4.棄去上清液，重懸離心管底部細(xì)胞沉淀，在T25培養(yǎng)瓶中加入5-6ml完全培養(yǎng)基，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

　　5.次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

　　6.注意：凍存細(xì)胞建議三管一起復(fù)蘇到一個T25培養(yǎng)瓶中

　　細(xì)胞傳代操作說明（貼壁細(xì)胞）實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺，CO2培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，離心機(jī)

　　實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗

　　實(shí)驗(yàn)材料：T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，需傳代的細(xì)胞，移液槍，槍頭，離心管

　　實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1.細(xì)胞于培養(yǎng)箱中，愈合度達(dá)到80%，可進(jìn)行傳代。

　　2.按T25培養(yǎng)瓶計(jì)，吸出完全培養(yǎng)基，并PBS緩沖液輕沖3遍，添加0.25%含EDTA胰酶2ml，消化2min（具體時間視細(xì)胞而定），后用完全培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來。1000r/min離心10 min，棄上清收集細(xì)胞，鋪至2個T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加7ml完全培養(yǎng)基。

　　3.注意：消化時間不易過長，消化前血清成分務(wù)必去除干凈，終止消化請用新鮮完全培養(yǎng)基，原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（終止消化或傳代）。細(xì)胞傳代操作說明（懸浮細(xì)胞）實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺，CO2培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，離心機(jī)

　　實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清，三抗

　　實(shí)驗(yàn)材料：T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，需傳代的細(xì)胞，移液槍，槍頭，離心管

　　實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1.細(xì)胞于培養(yǎng)箱中，密度達(dá)到懸浮細(xì)胞傳代標(biāo)準(zhǔn)（沉降后可鋪滿底面），可進(jìn)行傳代。2.按T25培養(yǎng)瓶計(jì)，吹打均勻，吸出完全培養(yǎng)基，1000r/min離心10 min，棄上清收集細(xì)胞，鋪至2個T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加7ml完全培養(yǎng)基。

　　3.注意：原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（傳代）。

　　細(xì)胞凍存操作說明

　　實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺，CO2培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，離心機(jī)

　　實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗，DMSO

　　實(shí)驗(yàn)材料：T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，需凍存的細(xì)胞，移液槍，槍頭，離心管，凍存管，記號筆實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1.取待凍存的細(xì)胞（按T25計(jì)）用0.25EDTA胰酶2ml消化2min，用完全培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來。1000r/min離心10min，棄上清收集細(xì)胞。如果是懸浮生長的細(xì)胞，則可直接離心收集細(xì)胞。2.加入1ml凍存液(90%FBS+10%DMSO)制成細(xì)胞懸液。

　　3.細(xì)胞懸液裝入3支凍存管中。

　　4.凍存管在4℃下存放30 min，轉(zhuǎn)放-20℃1.5～2 h，再轉(zhuǎn)人-70℃4-12 h后即可轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)(-196℃)，并登記。