貨源介紹

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　　細胞名稱EB-3（人Burkitt's淋巴瘤細胞）

　　種屬人

　　年齡（性別）男；3歲

　　組織來源

　　生長特性懸浮

　　細胞形態淋巴母細胞樣

　　背景描述EB-3細胞源自一名3歲患有Burkitt's淋巴瘤的黑人男孩的B淋巴細胞，EBNA陽性。

　　生長培養基RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S

　　培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃

　　細胞處理：

　　1）凍存細胞的復蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養。

　　該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

　　1.收集：將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

　　3.將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

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