貨源介紹

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　細胞名稱：CHO-K1倉鼠卵巢細胞亞株

　　描述：該細胞株是源自成年中國倉鼠卵巢深入活體組織切片的CHO細胞的亞克隆。動物種別：中國倉鼠雌

　　組織來源：卵巢

　　形態：上皮細胞

　　細胞馴化前的培養基的培養條件：F12K培養基(SIGMA,貨號N3520，添加NaHCO3 2.5g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。含量：>1x106細胞數

　　規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　用途：僅供科研使用。

　　細胞株馴化：

　　復蘇CHO-K1細胞轉入T25 cm2細胞培養瓶，以F12K基礎培養基添加10%血清培養，待細胞長滿單層后，加入0.25%胰蛋白酶消化，傳代至裝有完全培養基的T25 cm2細胞培養瓶（Corning）中繼續培養，當細胞鋪滿瓶底時，即得貼壁CHO-K1細胞。取貼壁CHO-K1細胞，換液，加入15 mL含血清的完全基和15 mL無血清CHO-K1專用培養基，2天后吸出一半培養液，加入等量的無血清CHO-K1，每2天重復一次此操作，直到胎牛血清濃度低于1%后，以基礎培養基B001繼續培養，即培養基中血清濃度依次以5%，2.5%，1.25%，0.625%，0%降低。細胞在無血清CHO-K1專用培養基中密度達到5×106cells/mL時，即得懸浮CHO-K1細胞。培養條件：37℃，5%CO2培養箱中靜置培養。運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。細胞接收后的處理：

　　1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

　　2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

　　3）懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基）。

　　4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代。細胞培養步驟：

　　一．培養基及培養凍存條件準備：

　　1）準備：CHO GROW CD2培養基98%GlutaMAX-1谷氨酰胺1%，P/S青霉素-鏈霉素1%

　　2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。3）凍存液：90%CHO-K1專用培養基，10%DMSO，現用現配。

　　二．細胞處理：

　　1）凍存細胞的復蘇：：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

　　注：第一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

　　細胞凍存，收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例；

　　3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例；

　　1.細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

　　3.將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。注意事項：

　　1.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

　　2.建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。