貨源介紹

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　　質粒載體網主要對載體質粒類目下產品展示,不僅提供質粒、菌種、細胞及培養基等相關產品訂購,同時可以為客戶提供質粒構建、載體設計及菌種細胞鑒定,還對包括ATCC、JCM、KCTC等進口微生物資源提供訂購及保藏服務。

　　種屬人源細胞系/肺、氣管、支氣管

　　到貨周期10-15個工作日

　　NCI-H1915人非小細胞肺癌細胞株建于1988年4月，源于一個腦轉移病人。

　　細胞特性

　　1）來源：肺癌，腦轉移

　　2）形態：上皮細胞樣

　　3）含量：>1x10e6個/mL

　　4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

　　5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　運輸和保存：使用含有優質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm培養皿或者T25培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

　　細胞用途：僅供科研使用。

　　細胞培養步驟

　　一．培養基及培養凍存條件準備：

　　1）準備RPMI-1640培養基(添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸鈉0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。

　　2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

　　3）凍存液：90%完全培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

　　二．細胞處理：

　　1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

　　3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

　　4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

　　3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。